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细胞免疫荧光阶段。

发布者:365bet赌城网址
来源:365bet在线娱乐城 日期:2019-11-10 10:08 浏览()
细胞免疫荧光实验的第一天:
将称重细胞的载玻片浸入PBS中三次,每次3分钟。
将载玻片用4%多聚甲醛固定15分钟,将载玻片浸入PBS中三次,每次3分钟。
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将100%的5%Triton X-100(在PBS中制备)在室温下透化20分钟(省略在细胞膜上表达的抗原)。
将载玻片在PBS中浸泡3次,每次3分钟,使PBS干燥,将正常的山羊血清滴加到载玻片上,并在室温下封闭30分钟。
将转移纸吸收到吸收纸上,将稀释良好的一抗添加到每个载玻片中而不洗涤,置于潮湿的盒子中并在第二天在4℃温育过夜。
添加荧光二抗:PBST浸泡和滑动3次,每次3分钟,在吸水纸上干燥多余的液体,然后加入稀释的荧光二抗,在20°C的潮湿箱中在孵化。将PBST切片浸泡3次,每次3次,在37°C下浸泡1小时。注意:通过添加二级荧光抗体,所有后续步骤都在最黑暗的地方进行。
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重新溶解的核心:在黑暗中与DAPI孵育5分钟,样品并用PBST 5分钟洗涤过量的DAPI 4次。
用吸收纸干燥称重板中的液体,用含有抗荧光猝灭剂的密封溶液密封,然后用荧光显微镜观察图像。